Molekulārā diagnostika: reālā laika polimerāzes ķēdes reakcijas

Pašlaik molekulārā diagnostika mehānisms, kas paredzēts polimerāzes ķēdes reakciju (PCR), kas bija impulss, lai izstrādātu lielu skaitu diagnostikas metodēm, slimību, kas balstās uz noteiktu ģenētisko materiālu. Veikšanai reālā laika PCR, izmantojot gēna fragmentu (jo īpaši nukleīnskābe) no izraisītājvielas, kas nav atrodama citiem cilvēkiem.

No PCR princips ir pavairot dažu patogēna DNS fragmentu miljonu reižu ar DNS polimerāze īpašā iekārta, kas minēta kā termokameru, kas nodrošina ciklisku atkārtošanos temperatūras režīma konkrēto programmu.

Diagnostics PCR ļauj atkārtot virkni pastiprinājumi, saglabājot fermentu aktivitāti. Kad pastiprinājums notiek vienmērīgi, vienā ciklā, kopiju skaitu par kādu noteiktu DNS no patogēniem divvietīgi, pēc trīsdesmit cikliem - simts un desmit. Tas ir iemesls, kāpēc PCR izmanto diagnostikā, lai noteiktu pietiekami mazas patogēnus, identifikāciju, kas ir iespējama bez tā.

Jāatzīmē, ka RNS nevar būt veidni PĶR reālajā laikā. Tādēļ, lai atklātu vīrusa RNS pirms pastiprināšanas, lai saņemtu DNS korelē ar atbilstošo fragmentu no tā. Polimerāzes ķēdes reakcija ļauj ražot DNS un RNS mērījuma patogēnu. Tādējādi iegūtā informācija tiek izmantota, lai efektivitātes terapiju izmanto, un novērtējumu par klīniskās prognozes uzraudzībai.

Turklāt, reālā laika PCR neprasa papildu darbības attiecībā pret atšifrēšanu mērķa DNS vai amplikoniem, kas kalpo kā barjera pret pareizu diagnozi un radīt viltus rezultātus. Šī pieeja ļauj neizmantot elektroforēzes soli, kas noved pie riska samazināšanas produktiem polimerāzes ķēdes reakciju. Tāpat, ņemot vērā samazinājumu skaita manipulācijas ar aģentu, samazina laiku aptaujas, tas vienkāršo procesu, samazina iespējamību kļūdas. PCR arī ļauj noteikt sākotnējo eksemplāru skaitu DNS patogēna klīniskā pētījumā, lai palīdzētu noteikt periodus saasinājumu un veikt savlaicīgus pasākumus, lai izārstēt pacientam.

Šodien pastāv liels skaits pastiprināšanas metodes fiksācijas reālā laikā. Visbiežāk izmantotie dažādas metodes, piemērojot amplikona saistīts ar fluorogenic zondēm, starojuma intensitāte, kas mainās atkarībā no uzkrāšanos amplikonu un reģistrēto reālajā laikā, izmantojot speciālu ierīci, ko sauc thermocycler ar optisko moduli. Tas nodrošina augsta līmeņa jutība analīze. Tajā pašā PCR produkta var noteikt, kopā ar lielu daudzumu blakusproduktu, laikā, kad izmanto elektroforēze to dažos gadījumos nav pamanījuši.

Ar PCR, izmantojot pozitīvos un negatīvos kontrolparaugus reālajā laikā. Tādējādi, pozitīvie un negatīvie paraugi pētījumā analizēts kā atsevišķu paraugu, koncentrāciju kontroles paraugā, pie kam tiek ieviests katrā šādā paraugā un iet visas analīzes soļus.

Šodien pastāv liels skaits ierīču veikšanai ar polimerāzes ķēdes reakciju. Tie ietver Bio-Rad, Applied Biosystems, Cepheid un Roche. Katrai no tām ir savas priekšrocības un trūkumi

Jāatzīmē, ka PCR - metode, diagnozes izmanto liela mēroga zinātnes un pētniecības un diagnostikas centros visā pasaulē, jo tas dod iespēju veikt tūlītēju rezultātu interpretāciju.